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本试剂盒是将SgPrep柱式PCR产物纯化试剂盒(货号：GS0050)改进，与96孔吸附柱结合，一次可同时处理96个不同样品，快速完成大批量PCR产物纯化。

本试剂盒适用于从PCR反应液或各种酶促反应液中纯化回收DNA片段。该试剂盒采用特殊的吸附膜，能够有选择性地吸附核酸分子，去除反应液中的各种酶蛋白、引物、dNTP等，得到高质量的DNA纯化产物，可直接用于酶切、测序等后续的分子生物学试验。

96孔PCR产物纯化试剂盒是使用硅胶膜作为介质，在一定的盐溶液和pH条件下。溶液中的DNA片段特异性结合到吸附膜上。通过洗涤进一步去除体系中的其他杂质，再通过洗脱液将DNA从吸附膜上释放，得到纯净的DNA。


对于PCR产物纯化试剂盒而言，过大或过小的片段都不利于回收。对于小于50bp的片段，PCR产物纯化试剂盒不能回收。PCR纯化试剂盒可以有效去除PCR反应体系中的引物、dNTP等影响后续反应的成分。用户如果需要回收50～100bp的片段，我们推荐使用SgPrep胶回收试剂盒，并且在操作过程中适当降低离心转速和增加异丙醇用量。


对于PCR产物纯化的后续应用而言，浓度通常比得率更为重要，因此，如果需要得到更高浓度的回收产物，尽量用更小的体积洗脱。PCR产物纯化试剂盒使用的新型吸附材料可以使洗脱体积低至15μL。

• 适用范围广，回收效率高，对于100bp～10kb之间的DNA片段回收效率在90%以上。
  
• 操作简单快速，整个回收过程仅需5分钟左右。
  
• 洗脱效率高，洗脱体积最小可低至15μL。

组分	5×96T	10×96T
Buffer B3	240mL	480mL
Wash Solution	120mL	240mL
Elution Buffer	50mL	100mL
96 Well Plate	5块	10块
Deep Well Collection Plate	10块	20块
96 Storage Plate	5块	10块
Sealing Film	5张	10张

保存：室温


Buffer B3中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

• 自备材料：水浴锅、低速离心机、无水乙醇、异丙醇等。
  
• 按瓶身标签说明在Wash Solution中加入相应量的无水乙醇（乙醇终浓度为80%），混匀后在瓶身做好标记。密封于室温保存。
  
• 按瓶身标签说明在Buffer B3中加入相应量的异丙醇（异丙醇终浓度为20%），混匀后在瓶身做好标记。密封于室温保存。
  
• Buffer B3在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于37℃溶解沉淀，待冷却至室温后使用。

提取步骤

• 将PCR反应液或酶促反应液移至一干净的Deep Well Collection Plate中，在每个对应的孔中加入5倍体积的Buffer B3，用Sealing Film封口后充分混匀。
  
  • 首次使用前请先检查是否已加入适量的异丙醇。
    
  • 若反应液体积过小，可用TE或水补足至100μL，然后再加入500μL Buffer B3。
    
  • 混匀后应短暂低速离心后再将sealing film取下，避免样品间交叉污染。
• 将96 Well Plate套放于Deep Well Collection Plate上，然后将混合液全部移入96 Well Plate所对应的孔中，4000×g离心30sec。倒掉Deep Well Collection Plate中的液体，将96 Well Plate套放于同一个Deep Well Collection Plate中。
  
  • 如果体系总体积大于700μL，则每次使用700μL，多次上柱。
    
  • 将滤出液再次加入96 Well Platet中再次过柱，可以进一步提高DNA回收率。
• 向96 Well Plate所对应的孔中加入500μL Wash Solution，4000×g离心30sec。倒掉Deep Well Collection Plate中的液体，将96 Well Plate套放于同一个Deep Well Collection Plate中。
  
  • Wash Solution首次使用前请检查是否已加入正确量的无水乙醇。
• 重复步骤3一次。
  
• 将96 Well Plate套放于同一个Deep Well Collection Plate中，4000×g离心1min。
  
  • 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
• 将96 Well Plate套放于96 Storage Plate上，然后在所对应的吸附膜中央加入15～40μL Elution Buffer，室温静置1～2min，4000×g离心1min。将所得到的DNA溶液置于-20℃保存或用于后续试验。
  
  • Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl，pH8.5，可以用TE或水（pH>7.0）代替。
    
  • 将Elution Buffer预热至60℃可以进一步提高得率。
    
  • 如果片段> 4kb，在37～60℃温浴2分钟可以显著提高得率。
    
  • 请勿使用小于15μL的洗脱液进行洗脱。

• PCR产物回收效率较低或者未回收到目的片段
  
  • Wash Solution中未加入正确量的无水乙醇。
    
  • 提高Buffer B3的相对浓度，增加DNA与吸附膜的作用时间（静置时间），在一定程度上可以提高回收率。
    
  • 如果纯化的片段长度大于4kb或者目的片段含量较少，可将洗脱液再次加入96 Well Plate进行洗脱，以提高回收效率。
    
  • 洗脱液加入位置不正确。洗脱液应加在硅胶膜的中心部位，以完全覆盖硅胶膜的表面，达到最大的洗脱效率。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值> 7.0，pH值过低可能导致低洗脱效率。
    
  • 洗脱时将洗脱液预热至60℃后使用，有利于提高洗脱效率。
    
  • 洗脱时间过短。洗脱时间对回收率也有影响。洗脱时放置1分钟可达到较好的效果。
• 回收的PCR产物进行后续酶切或者连接效率低
  
  • 若洗脱产物中含有残留的乙醇会影响酶切。可将离心后的96 Well Plate开盖室温晾干2～5分钟，有助于残留的酒精挥发完全。
    
  • 盐份的残留。请确保使用Wash Solution冲洗两次，每次500μL沿管壁加入，有助于彻底去除管壁上的盐份。
    
  • 回收后的PCR产物在反复冻溶的情况下，会加速末端A和整个PCR产物的断裂，从而造成与T载体连接或直接酶切效率的下降。建议回收后立即进行酶切或连接实验。
    
  • 选择合适的PCR产物和T载体的分子数比例，有助于提高连接效率。
    
  • 请确保PCR最后72℃ 5～10分钟的延伸时间，这样才有足够的PCR产物在末端带有A附加碱基，保证较高的连接效率。
• 回收的片段为什么电泳上样会漂起来？
  主要原因是纯化过程中的乙醇没有去除干净。可将离心后的96 Well Plate室温或50℃干燥2～5分钟，有助于残留的酒精挥发完全。

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